Detección de aflatoxina M1 en muestras de leche cruda de vacas en tanques de enfriamiento en Boyacá (Colombia) / Detection of aflatoxin M1 in raw cow milk samples in cooling tanks in Boyacá (Colombia)

RESUMEN Una de las principales formas de contaminación de la leche con micotoxinas es el consumo de alimentos fermentados que se encuentran contaminados con mohos principalmente de Aspergillus spp., los cuales producen toxinas que pueden llegar a constituirse como un problema para la salud publica debido a su estabilidad térmica y química. El objetivo del presente trabajo fue detectar las concentraciones de aflatoxina M1 en muestras de leche de vacas en tanques de enfriamiento en cuatro municipios del departamento de Boyacá durante un año, determinando las variaciones de acuerdo con la temporada. Se realizó un estudio de corte longitudinal, descriptivo cuantitativo. Se seleccionaron aleatoriamente cuatro tanques de enfriamiento de cuatro municipios distintos del departamento; cada uno se muestreó dos veces al mes durante todo el período de estudio y se procesaron mediante metodología Charm Ez Lite . Se realizó un ANDEVA para determinar las diferencias estadísticas entre las concentraciones de la aflatoxina M1 por cada trimestre. Se determinaron diferencias estadísticas entre cada uno de los trimestres del estudio encontrando un porcentaje de positividad de 74,06% del total de muestras positivas en los trimestres de verano. 28,12% (108) de las muestras tomadas durante todo el estudio fueron positivas, con concentraciones de la toxina que oscilaron entre 0,5 y 2,0 μg/Kg de leche. Se determinó por primera vez en el departamento de Boyacá las concentraciones y variaciones estacionales de aflatoxina M1 en muestras de tanques de enfriamiento de leche, encontrando las mayores concentraciones y número de casos positivos de aflatoxina M1 en los meses de verano.

ABSTRACT One of the main forms of contamination of milk with mycotoxins is the consumption of fermented foods that are contaminated with mold, mainly Aspergillus spp, which produce toxins that can become a public health problem due to their thermal and chemical stability. The objective of the present work was to detect aflatoxin M1 concentrations in cows' milk samples in cooling tanks in four municipalities of the department of Boyacá for one year, determining the variations according to the season. A longitudinal, quantitative descriptive study was carried out, four cooling tanks from four different municipalities in the department were randomly selected, each tank, in each municipality, was sampled twice a month throughout the study period and processed using Charm methodology Ez Lite®, an ANDEVA was performed to determine the statistical differences between aflatoxin M1 concentrations for each quarter. Statistical differences were determined between each of the quarters of the study, finding a positivity percentage of 74.06% of the total positive samples in the summer quarters. 28.12% (108) of the samples taken throughout the study were positive, with toxin concentrations ranging between 0.5 and 2.0 μg/Kg of milk. Seasonal concentrations and variations of aflatoxin M1 in milk cooling tank samples were determined for the first time in the department of Boyacá, finding the highest concentrations and number of positive cases of aflatoxin M1 in the summer months.

A comparative study of procedures for binding of aflatoxin M1 to Lactobacillus rhamnosus GG

ABSTRACT Several strains of lactic acid bacteria (LAB), frequently used in food fermentation and preservation, have been reported to bind different types of toxins in liquid media. This study was carried out to investigate the effect of different concentrations of Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC 53103) to bind aflatoxin M1 (AFM1) in liquid media. AFM1 binding was tested following repetitive washes or filtration procedures in combination with additional treatments such as heating, pipetting, and centrifugation. The mixture of L. rhamnosus GG and AFM1 was incubated for 18 h at 37 °C and the binding efficiency was determined by quantifying the unbound AFM1 using HPLC. The stability of the complexes viable bacteria-AFM1 and heat treated bacteria-AFM1 was tested. Depending on the bacterial concentration and procedure used, the percentages of bound AFM1 by L. rhamnosus GG varied from as low as undetectable to as high as 63%. The highest reduction in the level of unbound AFM1 was recorded for the five washes procedure that involved heating and pipetting. Results also showed that binding was partially reversible and AFM1 was released after repeated washes. These findings highlight the effect of different treatments on the binding of AFM1 to L. rhamnosus GG in liquid matrix.

Aflatoxin M1 Contamination Levels in Cheeses Sold in Isfahan Province, Iran

OBJECTIVES: Aflatoxin M1 (AFM1)-contaminated dairy products pose serious human health risks, causing liver and renal failure if consumed. They are also related to decreased milk and egg production in infected animals. This study investigated the AFM1 contamination levels in cheeses sold in Isfahan province, Iran, by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). METHODS: A total of 100 white cheese samples were randomly collected from supermarkets in Isfahan province and after extraction using dichloromethane were prepared for the ELISA. RESULTS: Of the 100 samples, 52 (52%) were contaminated by AFM1, at levels ranging from 50.2 to 424.4 ng/kg. The remaining 48% of the samples had undetectable AFM1 levels (< 50 ng/kg). Based on the standard limit set by the European Commission and Iran, 8% (8/100) of the AFM1-positive samples (with concentrations between 250.2 and 424.4 ng/kg) had levels higher than the permissible value of 250 ng/kg. CONCLUSION: Although the percentage of cheese samples in Isfahan province with AFM1 levels exceeding the national permissible limit was low, the examination of cheeses and the milk used for their production is nevertheless important for ensuring public health. Furthermore, optimum storage conditions of animal feed should be ensured, and livestock nutrition must be monitored for the presence of AFM1 and other aflatoxins.

Occurrence of aflatoxin M1 in bovine milk samples consumed in different regions of Brazil / Ocorrência de aflatoxina M1 em amostras de leite bovinoconsumido em diferentes regiões do Brasil

Two hundred and fifty-seven samples of milk proceeding from different geographical regionsof Brazil were analyzed for determining the presence of aflatoxin M1 (AFM1). The AFM1extraction was carried out using immunoaffinity column, separated by reversed-phase (C-18) high performance liquid chromatography (HPLC), and quantified by fluorescence detector.The Limits of Quantification (LOQ) were 0.008 µg/kg and 0.080 µg/kg to the fluid and the powder milk, respectively. AFM1 were detected in 209 (81.3 %) samples, being 26 (63.4 %), 105(84.0 %) and 78 (85.7 %) of pasteurized, UHT (Ultra-high Temperature) and powder milk,respectively. The highest concentration of AFM1 in powder milk was found in one sample from Minas Gerais (1.210 µg/kg). In UHT and pasteurized milk, the highest levels were detected inone sample from Sergipe (0.120 µg/kg) and one sample from Goiás (0.050 µg/kg), respectively.None of the samples analyzed in this study exceeded the Brazilian legal limits for AFM1.

Duzentas e cinquenta e sete amostras de leite provenientes das diferentes regiões geográficasdo Brasil foram analisadas para realizar a determinação de aflatoxina M1 (AFM1). As AFM1foram extraídas por meio de colunas de imunoafinidade, separadas por cromatografia líquidade alta eficiência em fase reversa (C-18) e quantificadas por detector de fluorescência (CLAE-FL).Os limites de quantificação (LQ) foram de 0,008 µg/kg e 0,080 µg/kg para o leite fluidoe em pó, respectivamente. AFM1 foi detectada em 209 (81,3 %) amostras, sendo 26 (63,4 %), 105(84,0 %) e 78 (85,7 %) para o leite pasteurizado, UHT (Ultra-high Temperature) e em pó,respectivamente. A maior concentração de AFM1 no leite em pó foi encontrada em umaamostra proveniente de Minas Gerais (1,210 µg/kg). No leite UHT e pasteurizado, os maioresníveis foram encontrados em uma amostra de Sergipe (0,120 µg/kg) e Goiás (0,050 µg/kg),respectivamente. Nenhuma amostra analisada ultrapassou os limites da legislação brasileira emvigor para AFM1.

Occurrence of aflatoxin M1 in bovine milk samples consumed in different regions of Brazil / Ocorrência de aflatoxina M1 em amostras de leite bovino consumido em diferentes regiões do Brasil

Two hundred and fifty-seven samples of milk proceeding from different geographical regions of Brazil were analyzed for determining the presence of aflatoxin M1 (AFM1). The AFM1 extraction was carried out using immunoaffinity column, separated by reversed-phase (C-18) high performance liquid chromatography (HPLC), and quantified by fluorescence detector. The Limits of Quantification (LOQ) were 0.008 µg/kg and 0.080 µg/kg to the fluid and the powder milk, respectively. AFM1 were detected in 209 (81.3 %) samples, being 26 (63.4 %), 105 (84.0 %) and 78 (85.7 %) of pasteurized, UHT (Ultra-high Temperature) and powder milk, respectively. The highest concentration of AFM1 in powder milk was found in one sample from Minas Gerais (1.210 µg/kg). In UHT and pasteurized milk, the highest levels were detected in one sample from Sergipe (0.120 µg/kg) and one sample from Goiás (0.050 µg/kg), respectively. None of the samples analyzed in this study exceeded the Brazilian legal limits for AFM1.

Duzentas e cinquenta e sete amostras de leite provenientes das diferentes regiões geográficas do Brasil foram analisadas para realizar a determinação de aflatoxina M1 (AFM1). As AFM1 foram extraídas por meio de colunas de imunoafinidade, separadas por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (C-18) e quantificadas por detector de fluorescência (CLAE-FL). Os limites de quantificação (LQ) foram de 0,008 µg/kg e 0,080 µg/kg para o leite fluido e em pó, respectivamente. AFM1 foi detectada em 209 (81,3 %) amostras, sendo 26 (63,4 %), 105 (84,0 %) e 78 (85,7 %) para o leite pasteurizado, UHT (Ultra-high Temperature) e em pó, respectivamente. A maior concentração de AFM1 no leite em pó foi encontrada em uma amostra proveniente de Minas Gerais (1,210 µg/kg). No leite UHT e pasteurizado, os maiores níveis foram encontrados em uma amostra de Sergipe (0,120 µg/kg) e Goiás (0,050 µg/kg), respectivamente. Nenhuma amostra analisada ultrapassou os limites da legislação brasileira em vigor para AFM1.

Aflatoxin M1 in pasteurized, UHT milk and milk powder commercialized in Londrina, Brazil and estimation of exposure / Aflatoxina M1 em leite pasteurizado e UHT e leite em po comercializados em Londrina, Brasil e exposicao estimada.

Aflatoxin M1 (AFM1) is found in milk and other excretion products after aflatoxin B1 intake. AFM1 is carcinogenic to humans, and known levels of dairy product contamination is important to understand the risks to which the population is exposed. The occurrence of AFM1 was evaluated in 42 milk samples commercialized in Londrina, Parana State, Brazil and this rate of occurrence was used to estimate this exposure. AFM1 determina tion was ca rried out by ELISA, and was detected in 100 % samples at levels ranging from 0.01 to 0.81 µ g/kg (mean 0.13 µ g/kg). None of the samples p resente d AFM1 above the maximum permitted level by Brazilian Legislation (0.5 µ g/kg for fluid milk and 5 µ g/kg for milk powder). The estimated daily intake (EDI) of AFM1 was evaluated, and the average intake was 0.468 ng/kg body weight (b.w.) for adolescents, 0.384 ng/kg b.w. for adults and 0.559 ng/kg b.w. for the elderly. Values of EDI of AFM1 found in Londrina pose a toxicological risk to the population investigated. To the best of our knowledge, this is the first report on estimat ed AFM1 dietary exposure from Parana, Brazil.

Aflatoxina M1 (AFM1) e encontrada no leite e em outros produtos de excrecao apos o consumo de aflatoxina B1. AFM1 e carcinogenica para humanos, e avaliar os niveis de contaminacao em produtos lacteos e importante para conhecer os riscos aos quais a populacao esta exposta. A ocorrencia de AFM1 foi avaliada em 42 amostras de leite comercializadas em Londrina, Estado do Parana, Brasil, e sua ocorrencia foi utilizada para estimar sua exposicao. A determinacao de AFM1 foi avaliada por ELISA, e foi detectada em 100% das amostras, em niveis variando de 0,01 a 0,81 µ g/kg (media 0,13 µ g kg). Nenhuma das amostras apresentou niveis de AFM1 acima do maximo permitido pela Legislacao brasileira (0,5 µ g/kg para leite fluido e 5 µ g/kg para leite em po). A ingestao diaria estimada (IDE) de AFM1 foi avaliada, e a ingestao media foi de 0,468 ng/kg de peso corporal (p.c.)/dia para adolescentes, 0,384 ng/kg p.c./dia para adultos e 0,559 ng/kg p.c./dia para idosos. Valores de IDE de AFM1 encontrados em Londrina supoem um risco toxicologico para a populacao investigada. Do melhor do nosso conhecimento, este e o primeiro trabalho sobre a exposicao estimada de AFM1 do Parana, Brasil.

Aflatoxin M1 in the urine of non-carriers and chronic carriers of hepatitis B virus in Maringa, Brazil

Exposure to aflatoxins (AFs) in the diet may favour the development of hepatocellular carcinoma (HCC) and the acute exacerbation of hepatitis in chronic hepatitis B virus (HBV) carriers. Measurement of biomarkers such as aflatoxin M1 (AFM1), a metabolite of aflatoxin B1 (AFB1), in urine allows for the assessment of populations exposed to aflatoxins. The aim of this study was to investigate the occurrence of aflatoxin M1 in the urine of HBV carrier and non-carrier patients. One group included 43 randomly selected HBV carriers treated at two hospitals in the city of Maringa, Brazil, from March to June 2008. Control group consisted of 29 healthy adult volunteers with anti-HBs positive and HBsAg negative test results. Detection of AFM1 was performed by fluorescence using high performance liquid chromatography (HPLC) and post-column derivation with the Kobra Cell®. Of the 72 samples analysed, 05/29 (17.2%) AFM1 positive samples were from HBV non-carriers, and 16/43 (37.2%) of samples were from chronic HBV carriers. This study showed AFM1 in the urine of the two surveyed population. However, there is evidence that the chronic HBV carriers have a higher risk of developing HCC due to additive interaction between AFs and HBV.

A exposição às aflatoxinas (AFs) na dieta é um fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma hepatocelular (CHC) e a exacerbação da hepatite aguda em indivíduos portadores do vírus da hepatite B (VHB). O uso de biomarcadores, como a aflatoxina M1 (AFM1) na urina, produto de biotransformação da aflatoxina B1 (AFB1), permite avaliar se a população está exposta às AFs. O objetivo do presente estudo foi investigar ocorrência de AFM1 na urina de portadores e não portadores crônicos do VHB. Foi selecionado um grupo, de forma aleatória, representado por 43 portadores do VHB atendidos em dois hospitais da cidade de Maringá, Brasil, no período de Março a Junho/2008. O grupo controle foi composto por 29 voluntários adultos saudáveis anti-HBs positivo e HBsAg negativo. A determinação de AFM1 foi realizada por meio de detecção por fluorescência em sistema de cromatografia a líquido de alta eficiência com derivação pós-coluna utilizando Kobra Cell®. Das 72 amostras analisadas, 05/29 (17,2%) foram positivas para AFM1 em indivíduos não portadores do VHB, e 16/43 (37,2%) de pacientes portadores do VHB. Este estudo demonstrou a ocorrência de AFM1 na urina dos dois grupos estudados. Entretanto, há evidências de que os portadores do VHB possuam alto risco no desenvolvimento do CHC devido ao efeito aditivo pela interação entre aflatoxinas e VHB.

Incidence of lipolytic and proteolytic fungi in some milk products and their public health significance

A total of sixty random samples of dairy products; 20 of either table butter, cooking butter or kareish cheese; were collected and subjected to mycological and mycotoxicological evaluation. The mean total mould counts were 7.3X 10[1] +/- 6X10[1, 1.8] X10[3] +/- 5.4X 10[2] and 4.1X 10[3] +/- 3.1 X 10[3] cfu m[-1] for table butter, cooking butter and kareish cheese samples respectively. Respective yeast counts were 1 X10[3] +/- 6.1 X 10[2], 3.3 X 10[4] +/- 3 X 10[4] and 1.5 X 10[4] +/- 1.3 X 10[4] cfu ml-1. The highest frequency distribution of all examined samples for mould and yeast counts lies within the range 10 -100 / gm. Aspergillus niger, A. flavus, Geotrichum spp. and Mucor spp. were isolated from the examined samples at varying percentages of 8.3- 41.7. The predominant species of yeasts isolated from table butter, cooking butter and kareish cheese were Candida spp., Rhodotorula spp., and Saccharomyces spp. The isolated moulds and yeasts were evaluated for proteolytic and lipolytic activities on Tributyrin .Aflatoxin M1 was detected in 4 kareish cheese samples in a variable levels ranging from 5 to 35 ppb. The economic and public health significance of isolated moulds and yeasts as well as the sanitary precautions were discussed

Mycoflora, mycotoxins, bacteriological analysis and molecular assay of some bacterial species from coffee beans in Saudi Arabia

The mycoflora analysis of some coffee beans in Saudi Arabia showed a wide range of fungal contamination in 31 samples collected from different markets in El-Riyadh. Thirty four species belonging to 16 genera and 28 species belonging to 18 genera were isolated from coffee beans on glucose and cellulose Czapek's agar medium at 25°C from seed-plate method. Aspergillus niger and A. flavus were the most prevalent species, but Penicilliun oxalicum was isolated in moderate occurrence, while 12 genera comprised 16 species and 8 genera comprised 10 species were isolated on the same types of media at 25°C from seed suspension method. A. niger was the most common species, while A. flavus and P. funiculosum were isolated in moderate occurrence. A. niger, also was the most prevalent on 20% sucrose-Czapek's agar medium at 25°C, but the genus Eurotium [3 spp] appeared in moderate occurrence. Five fungal species belonging to four genera were isolated on starch yeast extract agar medium at 45°C. A. fumigatvs and A. niger were the most prevalent thermo tolerant species, while three species of thermophilic fungi were of low or rare incidence. Thin layer chromatographic analysis of chloroform extracts of 31 coffee beans samples revealed that 20 samples were free from mycotoxins, while 11 samples were contaminate with aflatoxins B[1], B[2], G[1] and G[2] of concentrations ranged from 110-600 micro g/kg, but 6 samples were contaminate with sterigmatocystin ranged from 60-600 micro g/kg. Screening of the characteristic mycotoxins of 25 fungal isolates revealed that 17 of them produced, aflatoxin B[1] at 450 micro g/kg, ochratoxin A at 600 micro g/kg, ochratoxin B at 400 micro g/kg, and sterigmatocystin 280 micro g/kg from Aspergillus species, while three isolates of Penicillium produced penicillic acid [ranged from 720-240 micro g/kg] and one isolate of Trichoderma produced Trichodermine at 360 micro g/kg. The bacteriological analysis of the coffee bean samples indicated that Bacillus cereus was detected in six samples at levels [2x10 cfu/g], E. coli in two samples [14x10 and 89x10 cfu/g], Feacal coliform was detected in one sample only, while Staphylococcus appeared in 29 samples [55x103 cfu/g]. All samples were free from Salmonella. PCR assay for detection of some bacterial species revealed that all samples were negative for Yersinia enterocolitica, Campylobacter and Listeria monocytogenes, while the results of B. cereus and Salmonella were similar to the results obtained using cultural method

study of aflatoxin M[1] in UHT milk samples by ELISA

Aflatoxin M[1] [AFM[1]] levels in 52 samples of UHT milk that were produced by different plants in province of Tehran were analyzed by competitive ELIZA. AFM[1] was found in 100 percent of 52 of the UHT milk samples that were analyzed in this study. The range of contamination levels varied in two seasons of summer and autumn. AFM[1] in summer and autumn samples ranged from 22.40 to 84.80 and 19.40 to 93.60 ng/kg respectively, while the mean values were 69.22 and 65.50 ng /kg respectively. Statistical evaluation showed that there were not significant differences [p>0.05] between the concentrations of AFM[1] of UHT milk samples produced in summer and autumn. In other words, AFM[1] contents of UHT milk samples produced in summer were not lower than UHT milk samples produced in autumn. Almost 79.92% of the contaminated samples exceeded the maximum acceptable levels [50 ng/kg] that accepted by some of the European countries. It was, therefore, concluded that, high occurrence of AFM[1] in UHT milk samples was considered possible hazard for human health

[Determination of the amount of aflatoxin in milk samples delivered to Sanandaj pasteurized milk corporation]

Aflatoxins are toxic mold metabolites produced by toxigenic strains of Aspergillus species. They have an important role in the occurrence of a number of human diseases such as liver cancer, chronic hepatitis and cirrhosis. The aim of this study was to determine the amount of aflatoxin M1 in raw milk samples which had been collected for Sanandaj pasteurized Milk Corporation. A total of 84 raw milk samples from different places in Sanandaj and Tehran were collected randomly during 2 weeks [in February-2007]. After centrifugation of milk samples, upper creamy layer was completely removed and the lower layer was analyzed by using special ELISA kit made by Tecan S.r I corporation for determination of aflatoxin M1. Data were analyzed by means of ANOVA. Aflatoxin M1 was found in 77 of the milk samples examined. In the remaining samples [7 milk samples] aflatoxin was not found. In 67 milk samples the quantity of aflatoxin was within standard limits and in 17 samples aflatoxin level was higher than the maximum accepted limit [based on European Union standard]. There was a significant difference between the rate of milk contamination in different regions [p<0.001]. Presence of aflatoxin in dairy products is a serious problem for the public health, especially in infants and children who consume these products most frequently. Therefore milk and dairy products have to be inspected routinely for aflatoxin M1 contamination. To achieve a low level of aflatoxin Ml in milk, the milch cows' feeding should be under regular inspection for aflatoxin contamination

Determinacion de aflatoxina M1 en leche de Vaca / Determination of aflatoxin M1 in cow milk

Este estudio se realizó con 85 muestras de leche pasteurizada y UHT provenientes del muestreo hecho para análisis toxicológico de AFM1. El método analítico utilizado fue el de cromatografía líquida de alta presión (HPLC), con detector de fluorescencia. Se elaboró curva de calibración con concentraciones de 10,0, 20,0, 40,0, 60,0 y 80,0 ppt (ng/L), con R2 = 0,9862. No se detectó concentración alguna de AFM1 en las muestras analizadas en el Laboratorio de Salud Pública (Toxicología). Teniendo en cuenta estos resultados, que en principio son negativos para AFM1 en las muestras analizadas, no se descarta el que se deba mantener un programa de vigilancia y controles periódicos que garanticen la permanente inocuidad de este alimento.

The realized Study on 85 samples of pasteurized milk and UHT coming from the realized sampling for toxicological analysis of AFM1. The analytic method utilized was high pressure Liquid Chromatography (HPLC), with Fluorescence detection, curve calibration was elaborated with concentrations of 10.0, 20.0, 40.0, 60.0, and 80.0 ppt (ng/L), with R2 = 0.9862. Any concentration of AFM1 have been detected , in the analyzed samples at the Public Health Laboratory (Toxicology). Keeping in mind these results that are negative in principle for AFM1 in the analyzed samples, it´s advisable to keeping a surveillance program and periodic control that guarantes the permanent innocuousness of this food.

Influência da irradiação gama na destruição de fumonisina B1 em farinha de milho e de aflatoxina M1 em leite fluido e em pó / Gamma-irradiation effect on fumonisin B1 inactivation in corn flour and on aflatoxin M1 in powdered milk

Fumonisina B1 é a micotoxina produzida por Fusarium verticillioides e Fusarium proliferatum e é encontrada principalmente em milho e produtos a base de milho. Desde sua descoberta a fumonisina B1 tem sido associada a doenças em animais, como leucoencefalomalácia em cavalos e edema pulmonar em suínos. Em humanos, o consumo de alimentos com fumonisina B1 tem sido associado com câncer esofágico. A aflatoxina M1 é o principal metabólito hidroxilado encontrado no leite de animais que consumiram rações contaminadas com aflatoxina B1, bem como no leite de lactantes que consumiram alimentos com esta substância. Neste estudo foi verificado o efeito da irradiação gama (60Co), em doses que variaram de 0 a 20 kGy, quanto à capacidade de inativar fumonisina B1 em farinha de milho e aflatoxina M1 em leite fluido e em pó. A fumonisina B1 foi extraída das amostras com metanol: água(8:2). O extrato foi purificado em coluna de imunoafinidade, seguido de separação e quantificação por meio de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de fluorescência, após derivatização com ortoftaldialdeído. Para efetuar a determinação da aflatoxina M1, a amostra foi purificada em coluna de imunoafinidade e a separação e a quantificação por meio de CLAE com detector de fluorescência. Foi observada uma redução da concentração da fumonisina B1 na faixa de 11,2 % a 55,5% em doses de 3 a 20 kGy de irradiação gama (60Co). A concentração de aflatoxina M1 foi reduzida em 86,8 % e 37,9%, respectivamente no leite fluido e em pó, em dose de 20 kGy de radiação.

Aflatoxin M1 in milk by immunoaffinity column cleanup with TLC/HPLC determination

No período de 2002 e 2003, cento e sete amostras de leite cru, pasteurizado e UHT (ultrahigh treated temperature) comercializadas nas cidades de São Paulo e Marília (SP) foram analisadas para determinar Aflatoxina M1 (AFM1). A aflatoxina M1 foi detectada em 79 (73,8 por cento) amostras, variando de 0,02 0,26 mg/L. As amostras foram analisadas utilizando coluna de imunoafinidade para limpeza e cromatografia em camada delgada para determinação da AFM1. Para a otimização do método, os parâmetros avaliados foram: recuperação, repetitividade, limite de detecção e limite de quantificação. Baseado em adição de padrão nas amostras, os valores das recuperações variaram de 85,83 por cento e 73,86 por cento em níveis de 0,01-0,5 mg/L, respectivamente, e o desvio padrão relativo para repetitividade variou de 7,73-2,08 po cento. O limite de quantificação foi de 0,02 mg/L. Os resultados das amostras analisadas por este método tiveram boa correlação quando comparadas com a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Concluindo, a utilização de coluna de imunoafinidade fornece excelentes resultados na recuperação, sensibilidade e apresenta fácil operacionalidade. Apesar da alta incidência de aflatoxina M1 em amostras em ambas as cidades, o nível de contaminação pode não ser considerado um sério problema de saúde pública, de acordo com a legislação brasileira.

Chemical and microbiological evaluation of camel milk in Egypt

Studies on camel milk concentration of chemical and trace elements or its microbiological view are limited especially here in Egypt, and warrants further investigation. Camel milk is gaining more popularity. Most camel milk is consumed fresh. To determine chemical and mineral composition; and microbiological quality of Egyptian camel milk, as well aflatoxin M[1] detection. One hundred and eight camel milk samples were obtained at random from camels all over the country. Protein, fat, carbohydrates, moisture, ash and lactose were determined. Minerals as calcium [Ca], iron [Fe], Zinc [Zn], sodium [Na], potassium [K], magnesium [Mg], copper [Cu], phosphorous [P] and manganese [Mn] were measured in the ash. Twenty-one samples of camel milk were investigated for their microbiological quality. Also 21 samples from lactating mothers were collected for their microbiological assay. Proximate analyses indicated that Egyptian camel milk contain 4.26% fat, 3.27% protein, 4.31% lactose, 12.95% total solids, 0.75% ash, and 87.05% water. Lactose is the main component of Egyptian camel milk. It comprises 92.37% of the carbohydrate. Proximate analyses indicated that mineral composition [mg/100 gm] of Egyptian camel milk was: 111.36 Ca; 81.17 P; 0.23 Fe; 0.51 Zn; 57.84 Na; 156.2 K; 6.70 Mg; 0.061; Cu; and 0.0127 Mn. Human milk was free from any microbes while some camel milk are contaminated and had bacterial load above the permitted level. Both human and camel milk are free of Aflatoxin M[1]. The major components of mature camel milk differs from those reported previously for camels' milk. Protein, ash [mineral] contents of camel milk are higher than human beings; energy yield and fat, moisture, and total solids are similar to human milk. Camel milk is low in carbohydrates or lactose content relevant to human milk. Mineral content of camel milk agree with some reports and disagree with others on comparing with other camels' milk. Mineral content of camel milk are higher than that of human milk. The increase range from approximately 2 folds for Mg or Cu to approximately 18 folds for Mn. On the other hand, disregard of sanitary practices will result in heavily contaminated milk that spoils rapidly. However, milking performed under hygienic conditions with strict attention to sanitary practices will result in a product with low bacterial load and good keeping quality. Camel milk could be used as supplements in infant feeding but can not replace mothers milk

Otimização de metodologia por CCD para determinação de aflatoxina M1 em leite de cabra e investigação de sua ocorrência no Estado da Bahia / Optimization of methodology by TLC for determining aflatoxin M1 in goat’s milk and investigation of its occurrence in the State of Bahia

A aflatoxina M1 (AFM1) é um produto da biotransformação da aflatoxina B1, a qual é excretada no leite de animais que ingerem alimentos contaminados. Os objetivos deste trabalho foram otimizar o método por cromatografia em camada delgada (CCD) para análise de AFM1 em leite de cabra e avaliar sua ocorrência no Estado da Bahia. Foram coletadas 100 amostras de leite em cinco propriedades, localizadas na região do Recôncavo Baiano, durante o período de novembro de 2000 a agosto de 2002. A AFM1 foi determinada no leite por meio de método de CCD conforme Sabino et al. (1989) modificado com a utilização de acetato de chumbo na fase de purificação para promover a precipitação de proteínas do substrato, possibilitando a visualização da AFM1 na placa cromatográfica. Os limites de detecção e quantificação obtidos pela técnica modificada foram de 0,2 e 0,5μg/L, respectivamente, com percentual de recuperação de 89,6% e coeficiente de variação igual a zero. Estes resultados revelaram que esta metodologia mostrou-se eficiente para a determinação de AFM1 em leite caprino. Em todas as amostras analisadas não foi detectada a presença de AFM1, demonstrando a boa qualidade deste produto quanto à contaminação por esta toxina

Principais riscos químicos no leite: um problema de saúde pública / Chemical risks in milk: a problem of public health

A contaminação de leite por agentes químicos é considerada um problema de Saúde Pública. Os principais perigos químicos encontrados no leite são a aflatoxina M1, resíduos de medicamentos veterinários, metais, resíduos de praguicidas e as bifenilas policloradas. Estas substâncias induzem efeitos agudos, crônicos, mutagênicos, teratogênicos e carcinogênicos. Com o propósito de alertar para os riscos à saúde decorrentes da exposição aos toxicantes, este artigo trata da ocorrência destes contaminantes em leite, bem como as suas propriedades toxicológicas

Otimização da determinação da aflatoxina M1 em leite, utilizando coluna de imunoafinidade e cromatografia em camada delgada / Performance of determination for Aflatoxin M1 in milk by immunoaffinity column and thin layer chromatography

Um método utilizando coluna de imunoafinidade para limpeza e cromatografia em camada delgada, foi otimizado em nosso laboratório para determinar Aflatoxina M1 em baixas concentrações no leite.Para a otimização do método,os parâmetros avaliados foram: recuperação, repetividade,limite de detecção e limite de quantificação. Baseado em adição de padrão nas amostras, os valores das recuperações variaram de 85,83 e 73,86% em níveis de 0,01-0,5 mg/L, respectivamente, e o desvio padrão relativo para repetividade variou de 7,73-2,08%. O limite de quantificação estabelecido neste método foi de 0,02 mg/L.Os resultados das amostras analisadas por este método tiveram boa correlação quando comparadas com a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Adicionalmente, o método AOAC também foi otimizado, resultando em um limite de detecção e quantificação de 0,2 e 0,3 mg/L, respectivamente, indicando baixa sensibilidade desse método. A utilização de coluna de imunoafinidade forneceu excelentes resultados na recuperação, sensibilidade e fácil operacionalidade

Determinação de alfatoxina M1 e ácido ciclopiazônico em leites de consumo comercializados no Município de São Paulo- SP, Brasil / Determination of aflatoxin M1 and cyclopiazonic acid in fluid milk commecialized in São Paulo - SP, Brazil

A co-ocorrência de aflatoxina M1 (AFM1) e ácido ciclopiazônico (CPA) foi pesquisada em 40 amostras de leite de consumo comercializados no município de São Paulo e, completarmente, foi estimado o grau de exposição da população, através do cálculo da ingestão diária das toxinas, a partir dos resultados das amostras positivas e do consumo médio dos diversos tipos de leite. Para isto, foram utilizadas amostras de tipos de leites A, B, C e Longa Vida, pertencentes a 2 marcas diferentes, encontradas em lojas de hipermercados e padarias do Município de São Paulo. A unidade amostral foi constituída por embalagem original fechada de 1L, sendo que cada amostra foi proveniente de um lote de fabricação. A colheita das amostras foi realizada no período de janeiro a maio de 2002. A determinação da AFM1 foi efetuada através da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), usando a coluna de imunoafinidade como técnica de purificação. A pesquisa do CPA foi realizada através do método de extração com solventes polares, purificação por passagem em coluna de sílica gel e quantificação por cromatografia em camada delgada (CCD). Os métodos utilizados nas pesquisas de AFM1 e CPA foram avaliados através da execução de analises repetidas, em amostras de leite experimentalmente contaminadas, com ambas toxinas. Os resultados revelaram 23 amostras (57,5 por cento) positivas para AFM1, em níveis que variam de 10,6 a 121,2ng/L de leite. Os níveis médios de AFM1 nos leites tipos A, B, C e Longa Vida foram de 5,9; 26,6; 19,8 e 22,2ng/L, respectivamente. Não foi observada amostra positiva para CPA, tendo como limite de quantificação 3g de CPA/L de leite. Adotando-se o consumo diário de leite de 720ml, para crianças de 4meses de idade e utilizando o peso médio de 7Kg, estimou-se a ingestão diária média de AFM1 de 0,18; 1,64; 1,22 e 1,82ng/L de AFM1/Kg de peso corpóreo/ dia, para os leites tipos A, B, C e Longa Vida, respectivamente. Discute-se a importância destes dadospara a Saúde Pública e o estabelecimento de limites de tolerância para AFM1 em leite e derivados

Otimização da determinação de aflatoxina M1 em leite por coluna de imunoafinidade, cromatografia em camada delgada e sua ocorrência / Performance of determination for aflatoxin M1 in milk by immunoafinity column and thin layer chromatography

Um método utilizando coluna de imunoafinidade para limpeza e cromatografia em camada delgada, foi otimizado em nosso laboratório para determinar Aflatoxina M1 em baixas concentrações no leite. Para a otimização do método, os parâmetros avaliados foram: recuperação, repetividade, limite de detecção e limite de quantificação. Baseado em adição de padrão nas amostras, os valores das recuperações variaram de 85,83% e 73,86% em níveis de 0,01-0,5 mg/L, respectivamente, e o desvio padrão relativo para repetitividade variou de 7,73-2,08%. O limite de quantificação foi de 0,02 mg/L. Cento e sete amostras de leite pasteurizado, UHT e crú, comercializados nas cidades de Marília e São Paulo foram analisadas utilizando este método. A aflatoxina M1, foi detectada em 79 (73,8%) amostras, variando de 0,02-0,2mg/L. Os resultados das amostras analisadas por este método tiveram boa correlação quando comparadas com a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Adicionalmente, o método AOAC (1975) também foi otimizado, resultando em um limite de detecção e quantificação de 0,2 e 0,3 mg/L, respectivamente. Em 36 amostras de leite pasteurizado analisadas, foi detectada aflatoxina em 1(2,7%) amostra, indicando baixa sensibilidade desse método. Concluindo, a utilização de coluna de imunoafinidade fornece resultados na recuperação, sensibilidade e apresenta fácil operacionalidade. Apesar da alta incidência de aflatoxina M1, em amostras em ambas as cidades, o nível de contaminação pode não ser considerado um sério problema de saúde pública, de acordo com a legislação brasileira.